| 日期：2021-08-02 作者： 來(lái)源：食用菌商務(wù)網(wǎng) |
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組織分離是一種用子實(shí)體的某一部分來(lái)分離菌種的方法。
因?yàn)榻M織分離法操作簡(jiǎn)便，不易帶入雜菌，容易獲得純菌種。后代不易發(fā)生遺傳重組等變異，能保持原菌株的優(yōu)良特性。因此組織分離是目前應(yīng)用最廣泛的分離手段。
組織分離的方法
1. 選擇無(wú)污染并菇形健壯的蘑菇幼菇(6分成熟)，采摘后及時(shí)放入滅過菌的紙袋中帶回接種室，連同母種用試管培養(yǎng)基等用品一起放入接種箱或超凈工作臺(tái)內(nèi)消毒。
2. 先用75%的酒精消毒雙手，將鑷子、接種鏟、小刀等接種用用具用酒精消毒，用酒精棉擦一下，拿到酒精燈上燒一下。
3. 用略干的酒精棉球?qū)⒆幽夜貏e是基部與土壤交界處的灰塵或泥土擦拭干凈，擦拭過程中及時(shí)更換酒精棉球。
4. 切開羊肚菌，切取菌柄與菌蓋交接處組織較厚的部位，什么地方肉厚用什么地方，切取菌柄2~5mm組織塊2~3塊，用鑷子夾住，將組織塊在無(wú)菌水中涮一下，并在酒精燈上快速過幾下。（過程中少用升汞或酒精消毒，避免將羊肚菌菌絲全部殺死。）
5. 將組織塊放入培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在22~25℃避光培養(yǎng)，2~3d萌發(fā)出新菌絲，新菌絲長(zhǎng)到培養(yǎng)基上，48小時(shí)后，此時(shí)菌絲長(zhǎng)約0.2~ 0.4 cm，菌絲粗壯；56 ~ 72小時(shí)后，成功萌發(fā)的菌絲將長(zhǎng)至0.5 ~ 1.5 cm長(zhǎng)，菌絲纖細(xì)，無(wú)色，不濃密，前端近似整體，根根分明，此時(shí)可挑取菌落尖端進(jìn)行挑出純化。
6. 純化后的試管要貼上標(biāo)簽，注明接種日期和品種的名稱。
7. 純化的羊肚菌12 h左右，可見到從接種塊萌發(fā)到培養(yǎng)基上的新生菌絲，7天左右長(zhǎng)滿試管，并出現(xiàn)白色菌核，10天左右，小菌核由初始的白色，逐漸變淺黃、變大；培養(yǎng)15天左右后可放4度冰箱保存。
得到純菌種后進(jìn)行轉(zhuǎn)管操作，15～18天菌絲即可長(zhǎng)滿試管，挑選菌絲健旺、無(wú)污染的菌管再進(jìn)行轉(zhuǎn)接擴(kuò)繁，須經(jīng)出菇試驗(yàn)合格后用于生產(chǎn)。
羊肚菌皮薄，遇水，酒精不會(huì)萌發(fā)。根據(jù)以上方法，可進(jìn)行多次試驗(yàn)。（從業(yè)者需根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作來(lái)調(diào)整相關(guān)細(xì)節(jié)，以上操作僅供參考。）
注：羊肚菌作為一種子囊菌，與其他食用菌相比最大缺點(diǎn)是容易退化，變異和生霉。因此，分離菌種要進(jìn)行出菇和比較試驗(yàn)。
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